1、IVD从业者，我不做PCR试剂盒，培训知道的。核酸检测试剂盒叫荧光PCR探针法。试剂盒里分好几部分，最重要的是PCR反应体系：DNA聚合酶，镁离子，引物（新冠测2个基因和1个内标需要3对引物），探针（也要3对探针，发出三种波长的荧光），逆转录酶，dNTP（ATUCG会用部分U代替T），还有用于抗干扰的UDG酶（正常的DNA只有ATCG，PCR扩增出来的DNA会有AT（会用部分U代替T）CG，这样扩增出来的DNA链中有U，UDG酶能切断含U的DNA链，所以扩增DNA在空气中形成的气溶胶，不会影响其他样本）、RNA酶抑制剂（空气中液体里全都是RNA酶，会降解病毒的RNA）、Taq酶的抗体（Hot start，常温下能抑制Taq酶的活性，PCR扩增时高温让其失活，Taq酶就在高温时恢复活性开始扩增了）。

2、还有阴阳性对照，阴性为水，阳性通常的合成的DNA，新冠的N基因和ORFlab基因和内标基因。

3、内标的作用通常为人的基因，所有的样本结果内参基因有扩增曲线，否则无效。

4、反正流程：核酸提取，逆转录，cDNA高温95℃变性（同时Taq酶的抗体失活），剩下变性到退火延伸很多次循环，最后就得到结果了。荧光PCR仪的作用在扩增的同时能够监测探针的发光，得知扩增后DNA的量。

5、研究生期间一直都在做PCR，所以闭着眼都知道有什么…

6、首先试剂盒里要有说明书，国产用中文，进口用外文，非英文要搭配个英文的，很少有翻译中文的。

7、说明书内容很多，最重要的是告诉你不同的来源的核酸样本怎么匹配试剂，以及程序怎么设定。

8、一般pcr反应包含这么几个部分：模板（就是核酸样本），引物，缓冲液，超纯水，阳性对照，阴性对照。

9、其中模板是采集的核酸样本不会出现在试剂盒里。

10、超纯水用来稀释引物。

11、缓冲液中包含大量的ATCG用来按引物顺序继续合成。

12、如果是荧光定量pcr还有荧光标记探针。

13、新冠核酸检测采用QPCR，常见新冠核酸检测试剂盒组分包括反应预混液（Buffer），酶预混液，阳性对照品、阴性质控品。 提取完后第一步配液分装：按测试数将Buffer和酶混合配制成反应液，按1人份反应量分装进PCR管/板中（部分预分装试剂盒省略此步骤）。第二步加样：将样本加入PCR管/板中，盖盖/封膜，混匀离心。第三步扩增：按说明书程序设置，运行。第四步数据分析：设置阈值，按说明书确定本次实验有效后，读取每个样本Ct值，一般Ct值小于说明书参考值的样本为阳性，无Ct值的样本为阴性。

【#pcr试剂盒里到底有什么#】到此分享完毕，希望对大家有所帮助。